McMaster University

Objet publié

Dans le cadre de ce projet, une méthode analytique sera mise au point pour mesurer l’efficacité de la transduction au niveau de la cellule unique dans un modèle d’immunothérapie basé sur des vecteurs viraux modifiés génétiquement. La méthode recourra à l’amplification en chaîne par polymère (PCR) numérique à base de gouttelettes (ddPCR) mise en œuvre dans des dispositifs microfluidiques en polymère pour encapsuler les cellules modifiées avec des réactifs appropriés (lyse et mélange principal PCR), y compris les amorces et les sondes d’hydrolyse spécifiques au vecteur, ainsi que les amorces et les sondes pour le gène de référence. Les gouttelettes encapsulées seront ensuite soumises à un cycle thermique, puis disposées en monocouche pour l’imagerie par fluorescence. L’analyse des images et le comptage des gouttelettes positives pour chaque fluorophore permettront d’évaluer précisément l’efficacité de la transduction. Ce système de lyse et de PCR numérique en une seule étape vise à faciliter et à rationaliser l’évaluation de l’efficacité de la transduction virale, une étape importante dans la fabrication de thérapies par cellules T modifiées.